Спаривание пчелиной матки с трутнями происходит в полёте после достижения ею половой зрелости. Для спаривания пчелиная матка вылетает после 14 часов в тихую солнечную погоду. Трутни начинают вылетать раньше, после 12 часов, и ждут маток в полёте. Во время одного брачного вылета матка спаривается с 6-8 трутнями. Это предупреждает возможность близкородственного спаривания, ведущего к вырождению.
Если по каким-либо причинам пчелиная матка не спарилась в течение 1 месяца, то она теряет способность к оплодотворению.